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含乳饮料及其乳原料中酪蛋白含量 质谱联用仪测定

   日期:2021-06-09     浏览:342    评论:0    

本标准适用于含乳饮料及其原料中酪蛋白总含量的测定,不适用于发酵法、酶解法、水解法等工艺对蛋白质改性的样品。

一、原理

试样溶液中的酪蛋白采用等电点沉淀后复溶,用胰蛋白酶进行酶解,同时加入同位素内标,C18水相柱分离,采用液相色谱-串联质谱仪检测,内标法定量。

二、试剂

1、浓盐酸(HCl)。

2、甲酸(CH2O2):质谱级。

3、醋酸(CH3COOH):色谱级。

4、氯化钠(NaCl)。

5、乙腈(CH3CN):质谱级。

6、三羟甲基氨基甲烷(Tris,C4H11NO3)。

7、聚乙二醇辛基苯基醚 (Triton X-100, C34H62O11)。

8、胰蛋白酶(Trypsin,C6H15O12P3):质谱级,猪源、牛源、基因工程来源均可;建议采用基因工程级的胰蛋白酶以降低杂酶的影响。

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三、仪器和设备

1、高效液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源。

2、酶标仪。

3、分析天平:感量分别为0.001 g、0.000 1 g和0.000 01 g。

4、低温离心机:转速≥6 000 r/min。

5、恒温水浴锅或可控温培养箱。

6、pH计。

7、涡旋振荡器。

四、试样蛋白提取

含乳饮料固体试样(若含乳包装为独立包装,应与其他调味粉末混合后取样,例如:咖啡、奶茶等饮品):试样称取1 g~5 g (精确至0.001 g) 于锥形瓶中;若为乳饮料液体试样:精密量取试样10 mL 于锥形瓶中,加入30 mL 预温(40℃)的Tris-HCl溶液(3.2.5),混匀后,放入60℃水浴恒温振荡1 h,取出冷却后用Tris-HCl溶液(3.2.5)转移定容至50 mL容量瓶(V溶解体积)。

五、试样的稀释

为保证该实验在的酶解效率下进行,需根据试样中总蛋白的含量测定结果(5.3), 用Tris-HCl溶液(3.2.5)对复溶后的试样溶液进行稀释(f3稀释倍数),使试样稀释液中的总蛋白含量保持在0.2 mg/mL~0.7 mg/mL之间。


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